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國(guó)產(chǎn)elisa試劑盒優(yōu)化是否在您的重點(diǎn)之內(nèi)
更新時(shí)間:2018-09-28   點(diǎn)擊次數(shù):1497次

       在國(guó)產(chǎn)elisa試劑盒檢測(cè)實(shí)驗(yàn)中,zui讓大家關(guān)注的往往是一些操作技巧、步驟、保存、注意事項(xiàng),其實(shí)只要這些方面做好了之后基本就沒(méi)有什么問(wèn)題了。但是也有客戶反映,為什么我每一步都按照要求去做還是沒(méi)有做好呢?這就很可能是操作細(xì)節(jié)的問(wèn)題了。大家整理出一份ELISA實(shí)驗(yàn)的細(xì)節(jié)優(yōu)化方案,這些ELISA優(yōu)化是否在您的重點(diǎn)思慮范圍之內(nèi)呢?

一、包被原的性質(zhì)

    1.親和素生物素:先親和素先包被載體,加入生物素化的DNA,這種包被方法均勻、牢固,已擴(kuò)大應(yīng)用于各種抗原物質(zhì)的定量測(cè)定。

    2.脂類物質(zhì):可將其在有機(jī)溶劑中溶解后加入ELISA板孔中,開(kāi)蓋置冰箱過(guò)夜或冷風(fēng)吹干,待酒精揮發(fā)后,讓脂質(zhì)自然干固在固相表面。

    3.小分子必須依靠和大的蛋白載體偶聯(lián)后才能固定在固相載體上。
 

二、包被液的選擇

    一般選擇ph9.6的碳酸鹽緩沖液。但有時(shí)由于試驗(yàn)的需要,包被原的特殊性也可能采用中性的緩沖溶液來(lái)包。上海恒遠(yuǎn)提醒應(yīng)當(dāng)注意,由于蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是通過(guò)物理吸附結(jié)合的,靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團(tuán)與固相載體表面的疏水基團(tuán)間的作用,這種物理吸附是非特異性的,受蛋白質(zhì)的分子量、等電點(diǎn)、濃度等的影響,大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)通常含有更多的疏水基團(tuán),故更易吸附到固相載體表面。具體的試驗(yàn)還要有堅(jiān)固的理論外也要實(shí)踐,看一下zui終可不可以應(yīng)用到自己試驗(yàn)當(dāng)中去。常用的包被液除了剛才提到的pH9.6碳酸鹽緩沖液,還有pH7.2的磷酸鹽緩沖液和pH7-8的Tris-HCL緩沖液等等。

 

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