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檸檬酸(CA)含量測(cè)定樣本的前處理
更新時(shí)間:2021-08-26   點(diǎn)擊次數(shù):1199次

檸檬酸(CA)含量測(cè)定樣本的前處理:

組織、細(xì)菌或細(xì)胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離:

①稱取約0.1g組織或收集500萬細(xì)菌或細(xì)胞,加入1mL試劑一和10uL?試劑三,用冰浴勻漿 器或研缽勻漿。

②將勻漿600g,4℃離心5min。

③棄沉淀,將上清液移至另一離心管中,11000g,4℃離心10min。

④上清液即胞漿提取物,可用于測(cè)定從線粒體泄漏的α-KGDH(此步可選做)。

⑤在步驟④的沉淀中加入200uL試劑二和2uL?試劑三,超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W, 超聲3秒,間隔10秒,重復(fù)30次),用于線粒體α-KGDH活性測(cè)定。

測(cè)定原理:α-KGDH催化α-酮戊二酸、NAD+?和輔酶A生成琥珀酰輔酶A、二氧化碳和?NADH,NADH在340?nm有特征吸收峰,以NADH的生成速率表示α-KGDH活性。自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器:紫外分光光度計(jì)、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

雙特異性酪氨酸磷酸化調(diào)節(jié)激酶DYRK2抗體

鋅指結(jié)構(gòu)蛋白酶20抗體

C型凝集素受體CLEC13A抗體

雙甲基精氨酸水解酶2抗體

D酪氨酸激酶衰減蛋白1抗體

雙特異性酪氨酸磷酸化調(diào)節(jié)激酶3抗體

肌營養(yǎng)蛋白α抗體

多巴胺β羥化酶抗體

抑癌基因抗體

DNA甲基轉(zhuǎn)移酶1抗體

DNA甲基轉(zhuǎn)移酶-3α抗體

DNA甲基轉(zhuǎn)移酶-3β抗體

死亡受體3抗體

死亡受體4抗體

精神分裂癥易感基因抗體

蓬亂蛋白1抗體

異常凝血酶原/脫-γ-羧基凝血酶原抗體

結(jié)蛋白抗體

DISC1 C端抗體

DISC1 N端抗體

多能發(fā)育相關(guān)基因2抗體

結(jié)腸直腸癌缺失基因抗體

多巴胺脫羧酶抗體

防御素β1/Defensin β1抗體

DLX4抗體

DTX1抗體

絲裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1抗體


 

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