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研生試劑-果蠅類免疫染色的特殊性
更新時間:2014-05-21   點擊次數:1117次

                        研生試劑-果蠅類免疫染色的特殊性

         elisa試劑盒免疫組化染色的標準程序可以用于對果蠅類抗原的定位。一般而言,果蠅類標本染色的成功與否依賴于本章開始和第五章所討論的原則。果蠅類標本免疫染色的復雜性在于其不同發(fā)育階段出現(xiàn)不同的保護衣殼,包括以下結構:絨毛膜、卵黃膜和角質層。它們均是特定階段的自身環(huán)境保護屏障,在發(fā)育和生存中起著重要的作用,就方法而言,去除這些結構有利于抗體的透入,且不應改變所研究的抗原特性。因此,在設計果蠅類標本免疫染色的方案中應該考慮使背景降至zui低的程度,對抗體的選擇尤其關鍵。

 

             elisa試劑盒果蠅類標本免疫染色的方法可以分為兩個步驟。*步為處理標本,包括固定和透化處理組織或整個器官。要求處理條件強烈,以便去除果蠅類的保護衣殼、固定抗原以及有利于抗體透入。固定和透化方法的選擇可依據果蠅類發(fā)育的不同階段而定。在形成角質層前的胚胎早期,可用有機溶劑、甲醛和醇類的混合物固定和透化組織,以便抗體易于透入。正常情況下超聲處理可以打開角質層。本章介紹的固定方法包括整個胚胎發(fā)育的早期和晚期。來自發(fā)育晚期的組織通常先被破碎成碎片,然后按標準的多聚甲醛/去污劑法固定和染色。

 

    果蠅類標本染色的第二步是加入一抗及檢測。一抗的加入及檢測與后續(xù)的二抗染色有關,但僅有一點不同的是在zui后染色中取決于所需分辨水平。大多數抗原定位實驗使用酶標記的二級試劑。這種方法靈敏度高,并且不需要共聚焦顯微鏡。如要求更高的分辨率或需在同一樣本中觀察兩種抗原時,則采用熒光染料標記的二抗試劑。由于果蠅類標本較厚,要求使用共聚焦顯微鏡觀察染色結果,且依賴于良好的共聚焦設備。以下分別討論這兩部分技術。

 

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