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ELISA試劑盒HIV測定操作步驟
更新時間:2015-05-14   點擊次數(shù):1059次

ELISA試劑盒操作步驟
①、配液:將50ml濃縮洗滌液用蒸餾水或去離子水20倍稀釋至1000ml備用。
②、編號:將樣品對應微孔按序編號,每板設陰性對照3孔、陽性對照Ⅰ型、Ⅱ型各1孔,空白對照1孔。人ELISA試劑盒
③、加樣:分別在相應孔加入待檢標本、陰性、陽性對照100μl,用封板膜封板后置37℃溫育30min。人ELISA試劑盒
④、洗滌:小心把封板膜揭去,用洗板機選擇5次程序,洗板后拍干。
⑤、加酶:每孔加酶結合物100μl(空白對照孔除外),充分混勻,用封板膜封板后置37℃溫育30min。
   ⑥、洗滌:小心把封板膜揭去,用洗板機選擇5次程序,洗板后拍干。。
   ⑦、顯色:每孔加入顯色劑A液和B液各50μl,輕輕振蕩混勻,封板后置37℃避光顯色15min。
   ⑧、測定:每孔加終止液50μl,輕輕振蕩混勻。設定酶標儀波長為450nm(建議使用雙波長的酶標儀比色,參考波長630 nm),空白調零,讀取各孔OD值。
⑨、判斷結果:計算臨界值(cut-off)(CO)值。
臨界值=陰性對照A均值+0.12
正常情況下,陰性對照孔的OD值≤0.10(若1孔陰性對照的OD值>0.1應舍棄,若有2孔或2孔以上陰性對照的OD值>0.1,應重復實驗。)。樣品OD值<臨界值者為HIV抗體陰性。
   正常情況下,陽性對照孔的OD值≥0.80(若1孔陽性對照的OD值<0.8應舍棄,若有2孔或2孔以上陽性對照的OD值<0.8,應重復實驗。樣品OD值≥臨界值者為HIV抗體陽性。
注意:對于篩查陽性標本,應重新取樣雙孔復試,復試陽性者應按照《全國HIV檢測管理規(guī)范》送HIV確證實驗室進行確證試驗。

質量控制:
每塊板設陰陽性及空白對照,并于每次試驗用自制質控血清作質控,將質控血清孔OD值采用“即刻法"計算或標在質控圖上,如質控有效,表明試驗可靠;如失控,則要檢查試劑效期、儲藏溫度、試驗溫度是否正常、操作步驟是否正確,直至重新試驗使其在控。

干擾和交叉反應

生物參考區(qū)間
正常人陰性

患者檢驗結果的可報告區(qū)間
ELISA試劑盒陽性表示HIV病毒感染.

臨床意義:
    用于HIV感染的輔助診斷,抗HIV藥物治療的效果的監(jiān)測。

 

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